酶聯(lián)免疫實驗操作流程詳解

    今天給大家講解下酶聯(lián)免疫實驗整個操作流程的詳細(xì)解析，精彩內(nèi)容一起來看看吧！

       
實驗前準(zhǔn)備：將樣本和試劑盒室溫平行1小時，如果樣本是凍存樣本，應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進(jìn)行解凍（不建議直接室溫解凍）

自備材料：蒸餾水（去離子水）

操作流程：
1.將要進(jìn)行實驗的版孔進(jìn)行設(shè)定好，標(biāo)準(zhǔn)品5個點，每個點設(shè)定平行，需要用到10個孔，空白只需1個孔，剩下孔可以做為樣本孔。

2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)備好5個EP管，然后在每個EP管中加入150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號管中加入150標(biāo)準(zhǔn)品，用槍頭反復(fù)吹打10次左右（注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號管中取150微升加入到2號管，后面過程一次類推。zui后稀釋完，前面4個管中每管液體在150微升，5號管為300微升。濃度是從大到小。

3.標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白加樣：標(biāo)準(zhǔn)是每個濃度點2個孔（做平行），每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入50微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是，標(biāo)準(zhǔn)加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內(nèi)加完，如果時間拖的太長，會導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng)，這樣數(shù)值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘。

4.洗版：在孵育過程中可以將洗滌液配好，20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震蕩儀的話，可以講板子放入震蕩儀上5秒左右，然后靜止三十秒，沒有請忽略次過程）將板子在桌子上晃動5秒左右，然后靜置30秒，甩干，拍板。說明：甩干過程盡量要快，1秒內(nèi)就可以完成，不要慢慢傾斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。

5.每孔加入50微升的酶標(biāo)試劑，此處在空白孔中不需要加（空白孔為空），孵育30分鐘。

6.洗版同步驟4。

7.顯色，先每孔中加入50微升的顯色A液，然后每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘。

8.終止，每孔加入50微升的終止液，注意，加完終止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù)，超過時間讀數(shù)無效。在規(guī)定時間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。

9.至此，整個實驗結(jié)束

注意事項：
1.在做完整個實驗過儀器之前，儀器預(yù)熱半小時，這個計算好時間，也可以直接將儀器一直開著，直到整個實驗結(jié)束。

2.在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部，一般槍頭都懸空，可以將槍頭靠在孔邊緣，但槍頭尖懸空，如果槍頭上殘留液體看整體多少量，不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔。整個加液過程不要產(chǎn)生氣泡。（洗滌液除外）

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