ELISA試驗(yàn)做復(fù)孔問題介紹

徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院崔老師由同事介紹我公司，老師想做小鼠IL-6等相關(guān)指標(biāo)的ELISA試驗(yàn)，老師介紹到樣本量收集的較少（18個樣本，總共分了6組。不同組的樣本是不同藥物處理的），而試劑盒的zui小規(guī)格就是48T（48T可以檢測37個樣本，11孔做標(biāo)準(zhǔn)空白對照孔），我司銷售專員建議老師實(shí)驗(yàn)可以做個復(fù)孔，這樣的實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果會更加。

崔老師聽取了我司銷售專員的建議，在設(shè)計(jì)ELISA復(fù)孔檢查時，提出問題：是對同一個樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個孔，還是只稀釋一次，然后吸取兩次分別加到兩個孔？前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了，但做出來的結(jié)果兩個孔相關(guān)挺大的。

我司技術(shù)答復(fù)：

采用后者。如果在實(shí)驗(yàn)室階段，可能需要多次稀釋，然后將不同稀釋次數(shù)的分別做復(fù)孔，以便檢查稀釋過程中帶來的誤差；如果同一次稀釋的復(fù)孔一致的存在檢測差異大，可能ELISA板的均一性存在一定問題（排除操作因素）。如果不同稀釋次數(shù)差異大，說明稀釋方法有問題。

在ELISA實(shí)驗(yàn)中設(shè)復(fù)孔，目的是為了減少本次實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)帶來的影響，所以應(yīng)該用第二種，有條件的話復(fù)孔的數(shù)量可以增加，系統(tǒng)誤差更小。